MyPIPETMAN®: Kombinieren Sie funktionale Auswahlmöglichkeiten und PipettenpersonalisierungStudie identifiziert Zusammenhang zwischen Plasmametaboliten und COVID-19-Antikörperlä...Neues Kryo-TEM zur Beschleunigung der ArzneimittelforschungSolutions in Science Konferenz und Ausstellung für Laborwissenschaftler...Erstes Enterprise SaaS LIMS – vorab validiert für regulierte BranchenChemisches LDIR-Bildgebungssystem für die Analyse von MikroplastikDieser Artikel wurde freigeschaltet und kann gelesen werden.Das Ziel dieser Veröffentlichung ist die Entwicklung eines einfachen, präzisen, genauen und reproduzierbaren, verbesserten Umkehrphasen-Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographieverfahrens zur quantitativen Bestimmung von Chlorpheniraminmaleat, Ibuprofen und Pseudoephedrinhydrochlorid möglicher Abbauprodukte in einer kombinierten pharmazeutischen Dosierungsform.Das Ziel dieser Veröffentlichung ist die Entwicklung eines einfachen, präzisen, genauen und reproduzierbaren, verbesserten Umkehrphasen-Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographieverfahrens zur quantitativen Bestimmung von Chlorpheniraminmaleat, Ibuprofen und Pseudoephedrinhydrochlorid möglicher Abbauprodukte in einer kombinierten pharmazeutischen Dosierungsform.3-(4-Chlorphenyl)-N,N-dimethyl-3-pyridin-2-ylpropan-1-amin ist der IUPAC-Name für Chlorpheniraminmaleat.Die empirische Formel für Chlorpheniraminmaleat ist C20H23ClN2O4 (Abbildung 1, chemische Struktur von Chlorpheniraminmaleatsalz).Chlorpheniraminmaleat ist ein H-1-Rezeptorblocker und wirkt als Antihistaminikum, das zur Linderung von Symptomen von Allergien, Heuschnupfen und Erkältungen eingesetzt wird.Zu diesen Symptomen gehören Hautausschlag, tränende Augen, juckende Augen/Nase/Hals/Haut, Husten, laufende Nase und Niesen.2-[4-(2-Methyl-propyl)phenyl]propansäure ist der IUPAC-Name des Ibuprofens.Die Summenformel für Ibuprofen lautet C13H18O2 (Abbildung 2, chemische Struktur von Ibuprofen).Ibuprofen ist ein nicht-selektiver Inhibitor von COX-2, einem Enzym, das an der Prostaglandinsynthese des Arachidonsäurewegs beteiligt ist.Es wird angenommen, dass seine pharmakologischen Wirkungen auf die Hemmung von COX-2 zurückzuführen sind, die die Synthese von Prostaglandin verringert, das an der Vermittlung von Entzündungsschmerzen, Fieber und Schwellungen beteiligt ist [1-5].(1S,2S)-2-(Methylamino)-1-phenylpropan-1-ol-Hydrochlorid ist der IUPAC-Name des Pseudoephedrin-Hydrochlorids.Die empirische Formel für Pseudoephedrin-Hydrochlorid ist C10H16ClNO (Abbildung 3. Chemische Struktur von Pseudoephedrin-Hydrochlorid). Pseudoephedrin wird am häufigsten als abschwellendes Mittel bei Erkrankungen wie verstopfter Nase, verstopfter Nebenhöhlen und verstopfter Eustachischer Röhre verwendet, da es geschwollene Nasenschleimhäute schrumpfen lässt und reduziert Gewebehyperämie und Ödeme [6] Andere Anwendungen umfassen vasomotorische Rhinitis, Erstlinienbehandlung bei Priapismus und Off-Label-Use bei Hyperprolaktinämie, während Tierärzte Pseudoephedrin häufig Off-Label zur Behandlung von Inkontinenz bei Hunden und Katzen verwenden [6].In Verbindung mit anderen Medikamenten wird Pseudoephedrin häufig zur Behandlung von allergischer Rhinitis, Krupp, Sinusitis, Mittelohrentzündung und Tracheobronchitis eingesetzt [7].Abbildung 1. Chemische Struktur von Chlorpheniraminmaleat.Abbildung 2. Chemische Struktur von Ibuprofen.Abbildung 3. Chemische Struktur von Pseudoephedrinhydrochlorid.Für die gleichzeitige Bestimmung von Chlorpheniraminmaleat (CPM), Ibuprofen (IBU) und Pseudoephedrinhydrochlorid (PSEH) in kombinierter Darreichungsform ist keine Methode für verwandte Substanzen angegeben.Die vorliegende Studie umfasste die Entwicklung und Validierung der RP-HPLC-Methode zur Bestimmung von CPM, IBU und PSEH in kombinierter pharmazeutischer Darreichungsform.Reagenzien und Materialien Analytisch reine Standards von CPM, IBU und PSEH wurden von Supriya Lifescience (Mumbai, Indien), Hubei (Hubei, China) bzw. Malladi (Guindy, Chennai) bezogen.Analytisch reine Verunreinigungsstandards von Ephedrin, Ibuprofen-Verunreinigung E und Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C wurden von Ph.Eur (Europäisches Arzneibuch), USP (United States Pharmacopeia) bzw. Pharmaffiliates (Indien) bezogen.Methanol und Acetonitril von HPLC-Qualität wurden von JT Baker erhalten.Decan-1-Sulfonsäure-Natriumsalz in HPLC-Qualität, Triethylamin und Phosphorsäure 85 % wurden von Merck bezogen.Natriumhydroxid von HPLC-Qualität wurde von Sigma Aldrich bezogen.Kaliumdihydrogenphosphat in HPLC-Qualität wurde von Panreac bezogen.Das Wasser wurde unter Verwendung des Millipore Milli Q Ultrapure-Systems destilliert und entionisiert.Für die Studie wurde eine Sirupformulierung (Pharmactive Pharmaceutical Company, Türkei) verwendet, die eine gekennzeichnete Menge von 2 mg Chlorpheniraminmaleat, 200 mg Ibuprofen und 30 mg Pseudoephedrinhydrochlorid enthielt.Das Flüssigkeitschromatographiesystem besteht aus der Shimadzu LC20-Serie, ausgestattet mit einem PDA-Detektor, einer quaternären Pumpe und einem automatischen Injektor, 20 µl Fixed Loop.Die Analyten wurden bei 215 nm für Ibuprofen und Pseudoephedrinhydrochlorid und 225 nm für Chlorpheniraminmaleat überwacht.Die chromatographische Analyse wurde unter Verwendung eines Direkt-Inline-Filters und einer 1-cm-Guard-Patronenhalter-Vorsäule und einer YMC-Triart-C18-Säule (5 µm × 250 mm × 4,6 mm) durchgeführt.Alle Medikamente und Chemikalien wurden auf elektronischen Waagen Mettler Toledo XP26, XP2U, XP205 gewogen.Die chromatographische Trennung wurde unter Verwendung des zeitgesteuerten Gradientenmodus erreicht (Tabelle 1).Die mobile Phase bestand aus A: pH-2,5-Puffer (3,4 g KH2PO4, 5 g Decan-1-sulfonsäure-Natriumsalz und 5 ml Triethylamin in 1000 ml entionisiertem Wasser, mit H3PO4 auf pH 2,5 eingestellt) und B: Methanol (100 % ).Die Flussrate der mobilen Phase betrug 0,7 ml/min.Die Säulentemperatur betrug 45 °C und die Probentemperatur 15 °C.Das Injektionsvolumen betrug 20 μl.Verdünnungsmittel war pH: 7,2 Puffer: Methanol (500:500 v/v).Tabelle 1. Gradientenmodus.Zeit (Min.) Mobile Phase A (%) Mobile Phase B (%) Flussrate 0,01 48 52 0,7 27,00 48 52 0,7 27,01 35 65 0,7 37,00 35 65 0,7 37,01 35 65 0,6 55,00 35 65 0,6 55,01 35 65 0,6 55,01 35 0,5 0,6,0 65 60,01 48 52 0,7 75,00 48 52 0,7Herstellung von pH-7,2-Puffer: 6,8 g Kaliumdihydrogenphosphat und 1,2 g Natriumhydroxid wurden in 1000 ml destilliertem Wasser gelöst.Der pH-Wert wird mit ortho-Phosphorsäure auf 7,2 eingestellt.Zubereitung des Verdünnungsmittels: 500 ml pH 7,2-Puffer und 500 ml Methanol wurden gemischt, durch einen 0,45-μm-Membranfilter filtriert und entgast.Die PSEH-Stammstandardlösung wurde hergestellt, indem genau gewogene 9 mg Pseudoephedrinhydrochlorid-Arbeitsstandard in einen 20-ml-Messkolben überführt wurden.10 ml Verdünnungsmittel wurden zugegeben, gefolgt von Beschallung für 5 min unter Verwendung einer Ultraschallquelle.Die Lösung wurde mit dem Verdünnungsmittel auf das Endvolumen gebracht.Die CPM-Stammstandardlösung wurde hergestellt, indem genau gewogene 6 mg Chlorpheniraminmaleat-Arbeitsstandard in einen 100-ml-Messkolben überführt wurden.60 ml Verdünnungsmittel wurden zugegeben, gefolgt von Beschallung für 5 min unter Verwendung einer Ultraschallquelle.Die Lösung wurde mit dem Verdünnungsmittel auf das Endvolumen gebracht.Die IBU-Stammstandardlösung wurde hergestellt, indem 12 mg genau abgewogener Ibuprofen-Arbeitsstandard in einen 20-ml-Messkolben überführt wurden.10 ml Verdünnungsmittel wurden zugegeben, gefolgt von Beschallung für 5 min unter Verwendung einer Ultraschallquelle.Die Lösung wurde mit dem Verdünnungsmittel auf das Endvolumen gebracht.Zur Herstellung der Standardlösung wurden 2 ml PSEH-Stammstandardlösung, 0,5 ml CPM-Stammstandardlösung, 2 ml IBU-Stammstandardlösung in einen 100-ml-Messkolben überführt und die Lösung mit dem Verdünnungsmittel ( CIbuprofen = 0,012 mg/ml, CPeudoephedrin-HCl = 0,009 mg/ml, CChlorphenaminmaleat = 0,0003 mg/ml).Ungefähr 3 ml Sirup (entsprechend 60 mg Ibuprofen, 9 mg Pseudoephedrin-HCl und 0,6 mg Chlorpheniraminmaleat) wurden in einen 10-ml-Messkolben eingewogen, mit 5 ml Verdünnungsmittel gelöst und zugegeben, gefolgt von einer 2-minütigen Beschallung mit einer Ultraschallquelle .Die Lösung wurde mit dem Verdünnungsmittel auf das Endvolumen gebracht und 1 Minute lang verwirbelt und durch einen 0,22-μm-PVDF-Filter filtriert und in das HPLC-System injiziert.(CIbuprofen = 6,0 mg/ml, CPseudoephedrin-HCl = 0,9 mg/ml, CChlorpheniraminmaleat = 0,06 mg/ml).Präzision Die Präzision wurde gemäß den ICH-Empfehlungen sowohl als Wiederholbarkeit als auch als Zwischenpräzision bestimmt.Die mit 100 % Arbeitskonzentration hergestellte Standardlösung wurde sechsmal injiziert, um die Systempräzision zu bewerten.Aus den Injektionen erhaltene Peakflächen und der Wert der relativen Standardabweichung (RSD%) zwischen ihnen wurden berechnet.Es wurde ein RSD-Prozentsatz von nicht mehr als 5 % empfohlen.Wiederholbarkeit (Präzision der Methode) und Zwischenpräzision wurden ebenfalls bewertet.Zur Reproduzierbarkeit wurden 6 sirupgespikte Proben, die durch Zugabe bekannter Verunreinigungen in der Grenzkonzentration aufbereitet und die Analyse durchgeführt wurden.Für eine Zwischenpräzision wurden 6 mit Sirup versetzte Proben vorbereitet und an einem anderen Tag mit einem anderen Gerät und einer anderen Säule von einem anderen Analytiker analysiert.Wiederholbarkeits- und Zwischenpräzisionsergebnisse für IBU-, PSEH- und CPM-Verunreinigungen wurden berechnet.Die Differenz zwischen den Ergebnismittelwerten der beiden Analysten wurde ebenfalls berechnet.Linearität und Bereich Zum Nachweis der linearen Antwortbeziehung Peakflächen der Standardlösungen zwischen 0,015 % LOQ (Quantifizierungsgrenze) % und 1,2 % der Spezifikation bei 7 verschiedenen Konzentrationen (0,015 %, 0,1 %, 0,3 %, 0,5 %, 0,8 % , 1,0 %, 1,2 % ) für PSEH, die Standardlösungen zwischen 0,002 % LOQ (Limit of Quantification) % und 0,24 % der Spezifikation bei 7 verschiedenen Konzentrationen (0,002 %, 0,05 %, 0,06 %, 0,1 %, 0,16 %, 0,2 % , 0,24 %) für IBU, die Standardlösungen zwischen 0,1 % LOQ (Limit of Quantification) % und 0,6 % der Spezifikation bei 6 verschiedenen Konzentrationen (0,1 %, 0,15 %, 0,25 %, 0,4 %, 0,5 %, 0,6 %) für CPM , die Standardlösungen zwischen 0,015 % LOQ (Quantifizierungsgrenze) % und 1,2 % der Spezifikation bei 7 verschiedenen Konzentrationen (0,015 %, 0,1 %, 0,3 %, 0,5 %, 0,8 %, 1,0 %, 1,2 %) für Ephedrin, den Standard Lösungen zwischen 0,002 % LOQ (Quantifizierungsgrenze) % und 0,24 % der Spezifikation in 7 verschiedenen Konzentrationen (0,002 %, 0,05 %, 0,06 %, 0,1 %, 0,16 %, 0,2 %, 0,24 %) für Ibuprofen-Verunreinigung E, die Standardlösungen zwischen 0,1 % LOQ (Limit of Quantification) % und 0,6 % der Spezifikation bei 6 verschiedenen Konzentrationen (0,1 %, 0,15 %, 0,25 %, 0,4 %, 0,5 %, 0,6 %) für Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C wurden gemessen und Linearitätskurven wurden aufgetragen.Die vorbereiteten Linearitätslösungen wurden analysiert, der Schwellenwert y = ax + b gefunden und eine Regressionsanalyse durchgeführt (y: Fläche, a: Steigung, b: Achsenabschnitt, x: Konzentration, mg/ml).Es wurde ein Korrelationskoeffizient zwischen Konzentration und Flächen von mehr als 0,99 gesucht.Der Ansprechfaktor für Ephedrin, Ibuprofen-Verunreinigung E, Chlorfeniramin-Maleat-Verunreinigung C wird jeweils gemäß PSEH, IBU, CPM berechnet.Dann wurde dieser Response-Faktor in der Berechnungsformel für die prozentuale Verunreinigung verwendet.Nachweis- (LOD) und Quantifizierungsgrenzen (LOQ) LOD und LOQ wurden mit der Signal/Noise (S/N)-Methode bestimmt.Alle Verunreinigungen und Wirkstoffe wurden injiziert und das erhaltene S/N wurde bewertet.Der Spezifitätstest wurde durchgeführt, um die Fähigkeit der Analysemethode zu demonstrieren, nur die beabsichtigten Substanzen in einer gegebenen Probe zu messen.Standard, nicht dotierte Probe, Placebo, Verunreinigungsstandards, dotierte Probe, Verdünnungsmittel wurden in das HPLC-System injiziert und analysiert.Chromatogramme der injizierten Lösungen wurden ausgewertet.Die Genauigkeit wurde durch das Standardadditionsverfahren bestimmt.Die Genauigkeit der Methode wurde bei LOQ %, Freisetzungsgrenzwert und 120 % der Haltbarkeitsgrenze der Arbeitskonzentration durch Zugabe von Ephedrin, Ibuprofen-Verunreinigung E und Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C zur Probenlösung durchgeführt.Insgesamt wurden 9 Proben hergestellt (3 für jede Stufe) und dreifach injiziert.Wiederfindung (%) und RSD (%) wurden für jede Konzentration berechnet.Die Robustheit der entwickelten Methode wurde gemessen, um den Einfluss einer absichtlichen Variation der chromatographischen Bedingungen zu bewerten.Die Robustheit der Methode wurde durch Änderung der Flussrate (0,6 und 0,8 ml/min), der Säulentemperatur (40 °C und 50 °C), der Säulenmarke (Inertsil ODS-4-Säule 250 x 4,6 mm, 5 µm) und der Mobilität bewertet Phasen-pH-Änderung (pH:2,4-pH:2,6).Robustheitstests wurden durchgeführt, um Informationen über die kritischen Parameter zu erhalten, die die Reaktion beeinflussen (Peakfläche, Retentionszeit).Präzision Die Systempräzision wurde bestimmt, indem eine Standardlösung mit Injektionswiederholbarkeit durchgeführt wurde, und die erhaltenen RSD-Werte für PSEH, IBU und CPM wurden mit 0,11 %, 0,06 % bzw. 3,4 % ermittelt.Die niedrigen RSD-Werte zeigen, dass das System präzise ist.Auch beim Vergleich von Wiederholpräzision und Zwischenpräzision ergeben sich Differenzen zwischen Mittelwerten von zwei Analystenprobenergebnissen für die Präzision.Tabelle 2. Wiederholbarkeitsdaten der validierten Methode (%).Injection No Ephedrine (%) Ibuprofen Chlorpheniramine Impurity E (%) Maleate Impurity C (%) 1 1.03 0.21 0.48 2 1.04 0.20 0.50 3 1.03 0.20 0.50 4 1.03 0.20 0.50 5 1.03 0.20 0.50 6 0.98 0.20 0.46 Average 1.02 0.20 0.49 SD 0.02 0.00 0,02 RSD (%) 2,1 2,0 3,4Tabelle 3. Mittlere Präzisionsdaten der validierten Methode (%).Injection No Ephedrine (%) Ibuprofen Chlorpheniramine Impurity E (%) Maleate Impurity C (%) 1 1.05 0.20 0.50 2 1.05 0.20 0.51 3 1.04 0.20 0.48 4 1.04 0.20 0.49 5 1.03 0.20 0.48 6 1.02 0.20 0.51 Average 1.04 0.20 0.50 SD 0.01 0.00 0,01 RSD (%) 1,1 0,0 2,8Tabelle 4. Wiederholbarkeits- und Zwischenpräzisionsdaten Mittelwert und Differenzen Ergebnisse zwischen zwei Analytikern (%) Wiederholbarkeit (%) Zwischendifferenzen (%) Präzision (%) Ephedrin 1,02 1,04 0,02 Ibuprofen-Verunreinigung E 0,20 0,20 0,00 Chlorpheniramin-Maleat-Verunreinigung C 0,49 0,50 0,01Das Verfahren wird hinsichtlich der Kriterien Systempräzision, Zwischenpräzision und Wiederholbarkeit als genau befunden.Die Kalibrierkurve für PSEH erwies sich im Bereich von 0,000135–0,010801 mg/ml als linear mit einem Korrelationskoeffizienten von 1,00.Die Kalibrierungskurve für Ephedrin erwies sich im Bereich von 0,000135–0,010782 mg/ml als linear mit einem Korrelationskoeffizienten von 1,00.Die Kalibrierkurve für IBU erwies sich im Bereich von 0,000121–0,014537 mg/ml als linear mit einem Korrelationskoeffizienten von 1,00.Die Kalibrierungskurve für die Ibuprofen-Verunreinigung E erwies sich im Bereich von 0,000120–0,014371 mg/ml als linear mit einem Korrelationskoeffizienten von 1,00.Die Kalibrierkurve für CPM erwies sich im Bereich von 0,0000610–0,000366 mg/ml als linear mit einem Korrelationskoeffizienten von 1,00.Die Kalibrierungskurve für Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C erwies sich im Bereich von 0,0000447–0,000268 mg/ml als linear mit einem Korrelationskoeffizienten von 0,99.Tabelle 5. Linearitätsdaten für PSEH der validierten Methode.Concentration Level in (%) Theoretical Concentration of Response (Area) PSEH (mg/mL)(x-value) (y value) 0.015% 0.000135 5422.2 0.1% 0.000900 37886.2 0.3% 0.002700 108824.5 0.5% 0.004500 182038.8 0.8% 0.007201 289913.0 1.0% 0,009001 361572,8 1,2 % 0,010801 434768,3Tabelle 6. Linearitätsdaten für Ephedrin der validierten Methode.Konzentrationsniveau in (%) theoretischer Konzentration der Antwort (Fläche) Ephedrin (mg/ml) (x-Wert) (Y-Wert) 0,015% 0,000135 5493,8 0,1% 0,000898 37196,8 0,3% 0,002696 106510,5% 0,05% 0,05,05,05,05,05,05,05,05,05,05,05,05,05,05,05,05.015. 0,008985 358511,0 1,2 % 0,010782 428597,8Tabelle 7. Linearitätsdaten für Ibuprofen der validierten Methode.Concentration Level in (%) Theoretical Concentration of Response (Area) Ibuprofen (mg/mL) (x-value) (y value) 0.002% 0.000121 12918.8 0.05% 0.003028 254683.8 0.06% 0.003634 296903.5 0.1% 0.006057 480526.3 0.16% 0.009691 782628.5 0.2% 0,012114 984041,7 0,24 % 0,014537 1183409,2Tabelle 8. Linearitätsdaten für die Ibuprofen-Verunreinigung E der validierten Methode.Concentration Level in (%) Theoretical Concentration of Ibuprofen Response Impurity E (mg/mL) (x-value) (Area) (y value) 0.002% 0.000120 19923.0 0.05% 0.002994 252915.2 0.06% 0.003593 297940.5 0.1% 0.005988 486689.5 0.16% 0.009580 796728.5 0,2 % 0,011976 1003007,7 0,24 % 0,014371 1176968,8Tabelle 9. Linearitätsdaten für Chlorpheniraminmaleat der validierten Methode.Konzentrationsniveau in (%) theoretischer Konzentrationsantwort (Bereich) von Chl (mg/ml) (x-Wert) (Y-Wert) 0,1% 0,000061 3566,0 0,15% 0,000091 5309,0 0,25% 0,000152 8992,7 0,000244 1439,0 0,5% 0,000152 17768.8 0,6444439,0 0,5% 0,50305 17768.8,8 0,6444439,0 0,5% 0,5% 0,50305 17768.8,8 0,6444439.0 0,5% 0,50305 17768.8 0,6% 0,5% 1439.0 0,5% 0,5% 0,50305 17768.8 0,6% 0,5% 14439,0 0,5% 0,5% 0,50305 17768,8,8,8 0,6% ig. 0,000366 22039,5Tabelle 10. Linearitätsdaten für Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C der validierten Methode.Konzentrationsniveau in (%) theoretische Konzentration der Reaktions-CPM-Verunreinigung C (mg/ml) (x-Wert) (Fläche) (y Wert) 0,1% 0,000045 2732,0 0,15% 0,000067 2912,5 0,25% 0,00012 5461,2 0,4% 0,000179 8322,5% 0,5% 0,0002338255.32,000179 8322,5% 0,5% 0,0002338255,32,32,5,5% 0,5% 0,0002338255.32.32. 0,6 % 0,000268 13031,3Abbildung 4. Linearitätsdiagramm von Pseudoephedrin-HCl: Es wird ein Diagramm der Konzentration (x-Wert) gegen die erhaltene Flächenreaktion (y-Wert) aufgetragen.Abbildung 5. Linearitätsdiagramm von Ephedrin: Es wird ein Diagramm der Konzentration (x-Wert) gegen die erhaltene Flächenreaktion (y-Wert) aufgetragen.Abbildung 6: Linearitätsdiagramm von Ibuprofen: Es wird ein Diagramm der Konzentration (x-Wert) gegen die erhaltene Flächenreaktion (y-Wert) aufgetragen.Abbildung 7: Linearitätsdiagramm der Ibuprofen-Verunreinigung E: Es wird ein Diagramm der Konzentration (x-Wert) gegen die erhaltene Flächenreaktion (y-Wert) aufgetragen.Abbildung 8: Linearitätsdiagramm von Chlorpheniraminmaleat: Es wird ein Diagramm der Konzentration (x-Wert) gegen die erhaltene Flächenreaktion (y-Wert) aufgetragen.Abbildung 9: Linearitätsdiagramm der Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C: Es wird ein Diagramm der Konzentration (x-Wert) gegen die erhaltene Flächenreaktion (y-Wert) aufgetragen.Tabelle 11. Validierungsparameter für CPM, IBU und PSEH.Parameter Pseudoephedrin Ibuprofen Chlorpheniraminmaleat % Y-Achse 802,27 1836,1 159,8 Schnittpunkt Steigung 4 x 107 8 x 107 6 x 107 Reaktionsfaktor für Division 1,00* 1,00* 1,00* *Wird zur Quantifizierung unbekannter Verunreinigungen verwendet. Tabelle 12. Reaktionsfaktor von Verunreinigungen.Parameter Ephedrin Ibuprofen Verunreinigung E Chlorpheniramin Maleat Verunreinigung C % Y-Achse 407,61 5933,8 29,17 Schnittpunkt Steigung 4x107 8x107 5x107 Response Factor for Division 1.01** 0.99*** 1.21**** ** Berechnet basierend auf Pseudoephedrin HCl *** Berechnet basierend auf Ibuprofen **** Berechnet auf Basis von ChlorpheniraminmaleatDie angewandte Methode zeigte eine hervorragende Spezifität.Es gibt keine störenden Peaks im Chromatogramm, die von Verdünnungsmittel, Verunreinigungen und Placebo stammen.Das Spektrum der IBU-, PSEH- und CPM-Peaks interferierte nicht mit den anderen Peaks in Standard- und Probenlösungschromatogrammen.Die Selektivität des Verfahrens wurde nachgewiesen.Daten von gespikten Proben sind in Abbildung 10 dargestellt.Die Genauigkeit wurde durch das Standardadditionsverfahren bestimmt.Die Genauigkeit der Methode wurde bei LOQ %, Freisetzungsgrenzwert und 120 % der Haltbarkeitsgrenze der Arbeitskonzentration durch Zugabe von Ephedrin, Ibuprofen-Verunreinigung E und Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C zur Probenlösung durchgeführt.Insgesamt wurden 9 Proben hergestellt (3 für jede Stufe) und dreifach injiziert.Wiederfindung (%) und RSD (%) wurden für jede Konzentration berechnet.Die Ergebnisse sind in Tabelle 13-15 gezeigt.Alle Ergebnisse erfüllen die Akzeptanzkriterien.Tabelle 13. Wiederfindungsdaten der validierten Methode (%).Name der Lösung Wiederfindung von Ephedrin (%) 0,015 % 91,39 90,09 100,62 1,00 % 99,99 101,07 100,96 1,20 % 96,04 98,18 96,53 Durchschnitt 97,21 SD 3,3 RSD % 3,4Tabelle 14. Wiederfindungsdaten der validierten Methode (%).Name der Lösung Wiederfindung von Ibuprofen Verunreinigung E (%) 0,002 % 101,87 98,68 90,66 0,2 % 101,81 97,56 95,57 0,24 % 96,03 96,30 97,92 Durchschnitt 97,38 SD 3,4 RSD % 3,5Tabelle 15. Wiederfindungsdaten der validierten Methode (%).Lösungsname Rückgewinnung von Chlorpheniraminmaleat Verunreinigung C (%) 0,1 % 118,56 106,95 106,03 0,5 % 103,69 108,06 109,68 0,6 % 108,07 107,32 103,10 Durchschnitt 107,94 SD 2,3 RSD % 2.1Die LOD und LOQ der Methode sind in Tabelle 16 und Tabelle 17 aufgeführt. Die Methode kann zum Nachweis und zur Quantifizierung von Spuren von Verunreinigungen mit Ibuprofen, Pseudoephedrin-HCl und Chlorpheniramin-Maleat über einen weiten Konzentrationsbereich verwendet werden.Tabelle 16. LOD-Daten der validierten Methode (%).Substanzen LOD -Konzentration S/N (Signal/Rauschen) (mg/ml) Ephedrin 0,00000405 3.4 Ibuprofen Verunreinigung E 0,000036 13,3 Chlorpheniramin Maleat Verunreinigung C 0,000018 3.9 Pseudoephededrin Hcl 0,00000405 3.4 ibuprofen 0,00003 10.6. %).Substances LOQ Concentration S/N (Signal/Noise) (mg/mL) Ephedrine 0.0000135 12.5 Ibuprofen Impurity E 0.00012 46.0 Chlorpheniramine Maleate Impurity C 0.00006 10.6 Pseudoephedrine HCl 0.0000135 11.6 Ibuprofen 0.00012 26.9 Chlorpheniramine Maleate 0.00006 15.0Mit dem Robustness-Parameter wurde die Auswirkung von Änderungen der Methodenparameter und der Lösungsstabilität untersucht.Für dieses Ziel wurden die unten aufgeführten Parameter durchgeführt;- Flussrate: 0,6 ml/min und 0,8 ml/min - Säulentemperatur: 40 °C und 50 °C - pH-Änderung der mobilen Phase: pH: 2,3 und pH: 2,5 - Änderung der Säulenmarke: Inertsil ODS 4 250 mm x 4,6 mm x 5,0 umTabelle 18. Retentionszeit der Robustheit der Methode bei kleinen Änderungen der chromatographischen Bedingungen.Parameter Ephedrin Ibuprofen Chlorpheniramin (min) Verunreinigung E (min) Maleat Verunreinigung C (min) Normal 24,27 50,69 42,59 Flussrate – 0,6 ml/min 28,95 55,70 45,54 Flussrate – 0,8 ml/min 21,52 46,97 40,55 Säulentemperatur: 40 °C 26,35 51,83 43,52 Säulentemperatur: 50 °C 23,12 49,47 42,17 pH-Änderung der mobilen Phase: pH: 2,3 24,00 50,44 42,75 pH-Änderung der mobilen Phase: pH: 2,5 - - - Unterschiedliche Säule 20,65 47,19 40,82Tabelle 19. Retentionszeit der Robustheit der Methode bei kleinen Änderungen der chromatographischen Bedingungen.Parameter Pseudoephedrin Ibuprofen Chlorpheniramin HCl (min) (min) Maleat (min) Normal 21,64 52,09 41,64 Flussrate – 0,6 ml/min 25,72 57,12 44,81 Flussrate – 0,8 ml/min 19,13 48,26 39,66 Säulentemperatur: 40 °C 23,20 53,37 Säule 4 Temperatur : 50 °C 20,73 50,82 41,14 pH-Änderung der mobilen Phase: pH: 2,3 21,41 51,88 41,80 pH-Änderung der mobilen Phase: pH: 2,5 - - - Unterschiedliche Säule 18,81 48,26 40,20Tabelle 20. Relative Standardabweichung der Standardlösung bei kleinen Änderungen der chromatographischen Bedingungen.Parameter Pseudoephedrin Ibuprofen Chlorpheniramin HCl (%) (%) Maleat (%) Normal 0,27 0,21 1,52 Flussrate – 0,6 ml/min 0,12 0,16 0,80 Flussrate – 0,8 ml/min 0,15 0,08 0,76 Säulentemperatur: 40 °C 0,12 0,16 3,71 Säulentemperatur : 50 °C 0,09 0,13 0,76 pH-Änderung der mobilen Phase: pH: 2,3 0,27 0,21 0,69 pH-Änderung der mobilen Phase: pH: 2,5 - - - Unterschiedliche Säule 0,32 4,45 4,09Die erhaltenen Ergebnisse zeigten, dass es keine signifikante Änderung der Systemeignungsparameter für irgendwelche Komponenten außer der pH-Änderung gab.Das Verfahren ist robust gegenüber Änderungen der Flussrate, Säulentemperatur, Säule unterschiedlicher Hersteller.Das Verfahren ist empfindlich gegenüber pH-ÄnderungenDie Stabilität des Arzneimittels in Lösung während der Analyse wurde durch wiederholte Analyse der Standard- und dotierten Probenlösungen bei der Temperatur des automatischen Probengebers (15 °C) bestimmt.Peakflächen wurden aufgezeichnet und der Ähnlichkeitsprozentsatz wurde berechnet.Es wurde nachgewiesen, dass die Standardlösung bei 15 °C 117 Stunden und die Probenlösung 49 Stunden bei 15 °C stabil ist.Tabelle 21. Stabilität der Standardlösung für Pseudoephedrin-HCl.Zeit (Stunden) Änderung der Standardlösung % (Pseudoephedrin) (Fläche) 0 300558 - 15 301195 0,2 24 301889 0,4 49 300232 0,1 83 303030 0,8 91 305897 1,8 117 300282 0,1Tabelle 22. Stabilität der Standardlösung für Ibuprofen.Zeit (Stunden) Standardlösung (Ibuprofen) Veränderung % (Fläche) 0 933057 - 15 927982 0,5 24 928964 0,4 ​​49 929594 0,4 ​​83 930633 0,3 91 931667 0,1 117 937448 0,5Tabelle 23. Stabilität der Standardlösung für Chlorpheniraminmaleat.Zeit (Stunden) Änderung der Standardlösung % (Chlorpheniraminmaleat) (Fläche) 0 16134 - 15 16000 0,8 24 16507 2,3 49 15953 1,1 83 16258 0,8 91 16469 2,1 117 16649 3.2Tabelle 24. Stabilität der gespikten Probenlösung: Ephedrin.Zeit (Stunden) Ephedrin Veränderung % (Fläche) 0 309912 - 15 310737 0,3 24 310114 0,1 37 310348 0,1 49 311437 0,5 83 314325 1.4Tabelle 25. Stabilität der gespikten Probenlösung: Ibuprofen-Verunreinigung E Zeit (Stunden) Ibuprofen-Verunreinigung E (Fläche) Veränderung % 0 1051222 - 15 1043505 0,7 24 1044317 0,7 37 1039344 1,1 49 914473 1,1 83 913500 1.2Tabelle 26. Stabilität der gespikten Probenlösung: Chlorpheniraminmaleat-Verunreinigung C. Zeit (Stunden) Chlorpheniraminmaleat-Änderung % Verunreinigung C (Fläche) 0 13080 - 15 13151 0,5 24 13036 0,3 37 12124 7,3 49 13124 0,3 83 11031 15.7Diese HPLC-Methode ist empfindlich, genau, präzise, ​​reproduzierbar, spezifisch und stabilitätsanzeigend.Diese Methode wurde als genau und präzise befunden, wie durch die Wiederfindungsstudien und die relative Standardabweichung angezeigt.Der aus der Validierung ermittelte Relative Response-Faktor für Verunreinigungen kann zur Quantifizierung von Verunreinigungen in Pseudoephedrin, Ibuprofen, Chlorpheniraminmaleat in Routinetests verwendet werden, wodurch die Verwendung des Standards für Verunreinigungen nicht erforderlich ist.Darüber hinaus könnte die HPLC-Methode auch für die Routineanalyse von Ibuprofen, Pseudoephedrinhydrochlorid und Chlorpheniraminmaleat und ihren verwandten Substanzen in pharmazeutischen Dosierungsformulierungen vorgeschlagen werden.1. M. d.J. O'niel und PE Hackelman, Merk Index—An Encyclopaedia of Chemicals, Drugs and Biological, Merk Research Laboratory, 13. Auflage, 2006. 2. KD Tripathi, Essentials of Medicinal Pharmacology, Jaypee Brothers Medical Publisher LTD, New Delhi, India, 5. Auflage, 2003. 3. British Pharmacoeia, The Stationary Office on Behalf of the Medicine and Healthcare Products Regulatory Agency (MHRA), vol.3, London, UK, 2007. 4. Indian Pharmacopoeia, „Indian pharmacopoeial Commission“, Ghaziabad, Indien, 5. Ausgabe 2010, Bd. 2, S. 1071-72, 1479-83,3, S. 1900. 5. United States Pharmacopoeia und National Formulary, (22.) asiatische Ausgabe, The United States Pharmacopoeia Convention Inc., USA, S. 427–30, 953–55, 1471–73.6. Schwarzer RA, Hill DA.Rezeptfreie Medikamente in der Schwangerschaft.Bin Fam. Arzt.2003;67(12):2517-2524.http://aafp.org/afp/2003/0615/p2517.html.Veröffentlicht am 15. Juni 2003. Zugriff am 10. Oktober 2017. 7. Pseudoephedrin.Medline Plus-Website.https://medlineplus.gov/druginfo/meds/a682619.html.Aktualisiert am 15. August 2017. Zugriff am 10. Oktober 2017.Dieser Artikel wurde freigeschaltet und kann gelesen werden.In dieser Ausgabe Chromatographie - Umweltfreundliche RP-HPLC - Ersatz von Acetonitril durch Isopropanol in der Analytik und Reinigung mit Core-Shell-Chromatographie - Neue Gaschromatographen für...ICIF China 2022 - NEUE TERMINE23.11.2022 Frankfurt am Main, DeutschlandInternational Labmate Limited Oak Court Business Center Sandridge Park, Porters Wood St Albans Hertfordshire AL3 6PH Vereinigtes KönigreichT +44 (0)1727 858 840 F +44 (0)1727 840 310 E info@labmate-online.comCopyright © 2022 Labmate Online.Alle Rechte vorbehalten.